riagem de alto rendimento no cabelo para drogas usando o sistema Luxon Ion Source® MS/MS

Introdução

Como a raiz do cabelo é vascularizada durante o seu crescimento, as drogas ilícitas presentes na corrente sanguínea podem entrar na haste capilar através da raiz onde serão sequestradas. Portanto, o uso de drogas ilícitas pode ser revelado por meio da análise de uma pequena amostra de cabelo. Para aumentar o rendimento da análise de amostras de cabelo, o Luxon Ion Source® acoplado à espectrometria de massa em tandem (MS/MS) foi utilizado para a identificação e quantificação de drogas de abuso.

Para este projeto, propomos realizar um método de extração genérico para análise de drogas ilícitas no cabelo. A triagem utilizando o Luxon acoplado a um espectrômetro de massa (Luxon-MS/MS) foi escolhida como uma técnica analítica rápida.

Fonte de Ionização Luxon

O Luxon Ion Source® (Figura 1) é a segunda geração de introdução de amostra e fonte de ionização baseada na tecnologia LDTD® para espectrometria de massa. Luxon Ion Source® usa laser de diodo acoplado a fibra (Figura 2) para obter uniformidade térmica incomparável, proporcionando mais precisão, exatidão e velocidade. O processo começa com amostras secas que são rapidamente evaporadas usando calor indireto. As moléculas neutras termicamente dessorvidas são transportadas para uma região de descarga de corona. A protonação de alta eficiência e uma forte resistência à saturação iônica caracterizam esse tipo de ionização e é o resultado da ausência de solvente e fase móvel. Este processo de dessorção térmica produz sinal de íons moleculares de alta intensidade em menos de 1 segundo amostra a amostra e permite trabalhar com volumes muito pequenos.

Figure 1 – Luxon Ion Source®

Figure 2 – Schematic of the Luxon Ionization Source

Método de Preparação da Amostra

Uma pré-lavagem do cabelo foi realizada para remover contaminantes externos utilizando metanol.

• 10 mg de cabelo cortado em pequenos pedaços foram transferidos para um frasco.
• 2 mL de metanol contendo Ácido Trifluoroacético (TFA) a 0,5% (com padrão interno, PI) foram adicionados e as amostras foram embebidas a 60°C por 1h45. As amostras foram então sonicadas por 15 minutos.
• Após a extração, 500 µL da amostra foi misturada com 200 µL de uma solução de KH₂PO₄ (1 mM) / BSA (100 µg/mL) em água.
• 8 μL do extrato foi colocado em uma placa de 96 poços LazWell™ e evaporados até a secura a 40°C por 8 minutos.
• A análise Luxon-MS/MS foi feita após uma evaporação completa.

Parâmetros LDTD-MS/MS

LDTD

Modelo: Phytronix, Luxon S-960

Gás carreador: 6 L/min (ar)

Padrão de Laser:

• 3 segundos de rampa para 55% de potência
• Segure por 2 segundos

MS/MS

Modelo: Sistema Q-Trap® 5500, Sciex

Ionização: APCI

Resultados e Discussão

Precisão

Amostras cravadas em torno do ponto de decisão e soluções em branco foram utilizadas para validar a precisão do método. Cada concentração não deveria exceder 20% CV e a concentração média ± 2 vezes o desvio padrão (DP) não deveria se sobrepor a outras concentrações no ponto de decisão. A área do pico contra a razão PI foi utilizada para normalizar o sinal. As extrações replicadas foram depositadas em uma placa LazWell™ e secas antes da análise. Nenhuma sobreposição no ponto de decisão foi observada para todas as curvas e o %CV ficou abaixo de 15% para experimentos dentro da corrida. Os resultados usando a sobreposição de ± 2 DP foram plotados. A Figura 3 mostra os resultados do teste dentro da corrida para anfetamina. Resultados semelhantes foram obtidos para as outras drogas.

[AN-1903_FIGURE_3]

Figura 3 – Curvas de precisão dentro da corrida para anfetamina

Para o experimento de precisão entre corridas, cada conjunto de amostras fortificadas foram analisadas em triplicata em cinco dias diferentes. A Tabela 3 mostra os resultados de precisão entre corridas.

Estabilidade úmida de extratos de amostra

Após a extração, os extratos de amostra foram mantidos a 4°C em recipientes fechados. Após 4 dias, os extratos de amostra foram colocados em uma placa LazWell™ e analisados. A precisão no padrão de corte de 50% está relatada na Tabela 4 para Anfetamina. Todos os resultados estão dentro do intervalo aceitável (critério %CV ≤20%) para 4 dias a 4°C. Resultados semelhantes foram obtidos para as outras drogas.

Estabilidade seca de amostras detectadas em LazWell™

As amostras extraídas foram colocadas em uma placa LazWell™ e mantidas à temperatura ambiente antes da análise. A precisão no padrão de corte de 50% está relatada na Tabela 4 para Anfetamina. Todos os resultados estão dentro do intervalo aceitável (critério %CV ≤20%) para 2 horas à temperatura ambiente. Resultados semelhantes foram obtidos para as outras drogas.

Luxon-MS/MS: triagem de amostra

Espécimes de amostra foram extraídas e analisadas utilizando um método Luxon-MS/MS. Após uma dessorção rápida, amostras, amostras fortificadas e em branco foram avaliadas usando a razão da área de pico. Todas as amostras com uma concentração superior ao padrão de corte foram classificadas como amostras positivas para drogas. A Tabela 5 mostra os resultados da triagem e confirmação das amostras. Todas as amostras foram analisadas utilizando o método de confirmação LC-MS/MS para validação cruzada. Não foram observados falsos positivos ou falsos negativos utilizando o método de triagem Luxon-MS/MS.

Conclusão

Luxon Ion Source® combinado com o sistema de espectrometria de massa Q-Trap 5500 permite a triagem ultrarrápida (8 segundos por amostra) de drogas na amostra de cabelo utilizando uma preparação de amostra genérica.

Legenda:

APCI: ionização química de pressão atmosférica

CE: energia de colisão

Conc: concentração

N: número de amostras

%CV: % do coeficiente de variação

%Nom: % nominal