Triagem de alto rendimento no cabelo para drogas

Introduction

Como a raiz do cabelo é vascularizada durante o seu crescimento, as drogas ilícitas presentes na corrente sanguínea podem entrar na haste capilar através da raiz onde serão sequestradas. Portanto, o uso de drogas ilícitas pode ser revelado por meio da análise de uma pequena amostra de cabelo. Para aumentar o rendimento da análise de amostras de cabelo, o Luxon Ion Source^® acoplado à espectrometria de massa em tandem (MS/MS) foi utilizado para a identificação e quantificação de drogas de abuso.

Nosso objetivo para esta nota de aplicação é utilizar um método automatizado de preparação de amostras para a triagem de drogas em amostras de cabelo usando uma única operação no LDTD-MS/MS.

O LUXON-MS/MS oferece especificidade combinada com uma análise ultrarrápida para um método de triagem incomparável. Para desenvolver esta aplicação, nos concentramos em realizar uma preparação de amostra rápida e simples. As drogas são analisadas simultaneamente com resultados de triagem quantitativa obtidos em menos de 9 segundos por amostra.

Método de Preparação da Amostra

Extração automatizada de amostras

• 10 mg de cabelo cortado em pedaços pequenos foram transferidos para tubos com código de barras, legíveis pelo sistema de extração Azeo.
• Uma pré-lavagem do cabelo foi realizada para remover contaminantes externos utilizando 1 mL de Metanol, embebido por 5 minutos e decantando.
• 1 mL de metanol contendo Ácido Trifluoroacético (TFA) a 0,5% (com padrão interno) foi adicionado e as amostras foram embebidas a 60°C por 1h45. As amostras foram então sonicadas por 15 minutos.
• Após a extração, os frascos foram transferidos para o sistema Azeo.
• Cada frasco com código de barras foi escaneado pelo sistema Azeo Liquid Handler (Figura 1).
• 20 µL de solução de dessorção (KH2PO4 (0,1 mM) em água) foram misturados com 20 µL de amostra.
• 8 µL de mistura foram adicionadas em uma placa 96-LazWell™
• As amostras foram evaporadas até a secura a 40°C por 5 minutos.
• A análise Luxon-MS/MS foi realizada após uma evaporação completa.

Parâmetros LDTD-MS/MS

LDTD

Modelo: Luxon SH-960, Phytronix

Gás carreador: 4.5 L/min (ar)

Padrão de laser:

• Rampa de 3 segundos para 55% de potência
• Segure 2 segundos com 55% de potência

MS/MS

Modelo MS: LCMS-8060, Shimadzu

Ionização: APCI

Tabela 1 – Transição da espectrometria de massa (positiva)

Tabela 2 – Transição da espectrometria de massa (negativa)

Resultados e Discussão

Teste inicial de pontos de corte

Tabela 3 mostra os pontos de cortes de triagem sugeridos atualmente utilizados na indústria.

Tabela 3 – Analitos e pontos de corte

=

Pico de dessorção

Figura 2 mostra um pico de dessorção típico para uma amostra em branco para cocaína e Figura 3 mostra um pico de dessorção típico para uma amostra de ponto de corte para cocaína. Resultados semelhantes foram obtidos para as outras drogas.

Precisão

Amostras cravadas em torno do ponto de decisão e soluções em branco foram utilizadas para validar a precisão do método. A área do pico contra a razão do padrão interno (PI) foi utilizada para normalizar o sinal. As extrações replicadas foram depositadas em uma placa LazWell™ e secas antes da análise.

Os seguintes critérios de aceitação foram utilizados:

• Cada concentração não deveria exceder 20% CV
• A concentração média ± 2 vezes o desvio padrão não deveria se sobrepor a outras concentrações no ponto de corte

Tabela 4 mostra os resultados de precisão no nível do ponto de corte.

Tabela 4 – Precisão entre corridas

Conclusão

O Luxon Ion Source® combinado com um sistema de espectrometria de massa Shimadzu LC-8060 permite a triagem ultrarrápida (9 segundos por amostra) de drogas no cabelo utilizando um método de preparação de amostra simples e automatizado.